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猪肝中莱克多巴胺残留检测方法——气相色谱一质谱法(一)
【来源/作者】周世华 【更新日期】2017-03-17

1、安全要求

实验操作时穿工作服、戴口罩和手套;提取和净化操作都应在通风橱中进行,避免溶剂气体吸人和皮肤接触;废弃的化学试剂收集到专用容器中集中处理。

2、急救措施

皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗,有机溶剂或酸、碱溶液溅人眼中用清水灌洗。

3、适用范围

该标准操作规程适用于猪肝中莱克多巴胺残留量的检测。

4、职责

进行该项检验的检验员必须按该标准操作规程进行检验,质量监督员负责监督该标准操作规程的正确执行。

5、检测原理

试料用高氯酸溶液消解后,残留的莱克多巴胺经提取、净化、洗脱、双三甲基硅基三氟乙酰胺(BsTFA)衍生后,用气相色谱一质谱仪测定,外标法定量。

6、方法灵敏度

本方法中,莱克多巴胺在猪肝中残留的定量。

7、注意事项

7、1 过柱净化时上样、淋洗、洗脱的流速保持在l~2mL/min。

7、2衍生化过程中,注意保持干燥。

8、材料、仪器、试剂的准备及基本要求

除特别注明外,以下所用试剂均为分析纯;水为符合GB/T6682规定的一级水。

8、1 对照品、试剂、材料和标准储备液、标准工作液准备

8、1.1 盐酸莱克多巴胺含盐酸莱克多巴胺不得少于96.0%。

8、1.2 高氯酸

8、1.3 氯化钠

8、1.4 盐酸

8、1.5 乙酸乙酯

8、1.6 无水甲醇

8、1.7 氨水

8、1.8 甲苯

8、1.9 无水碳酸钠

8、1.10 双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA) 德国,Aldrich公司。

8、1.11 0.1moL/L高氯酸溶液 取9mL高氯酸,加水稀释至1 000mL。

8、1.12 0.1moL/L盐酸溶液 取盐酸9mL,加水至1 000mL。

8、1.13 0.03moL/L盐酸溶液 取盐酸2.7mL,加水至1 000mL。

8、1.14 4%氨化甲醇 取氨水4.0mL,加甲醇至l00mL。

8、1.15 10%碳酸钠溶液 取无水碳酸钠10g,加水溶解至100mL。

8、1.16 SCX固相萃取柱 Supelclean 500mg,3mL。

8、1.17 标准储备液的制备准确称取盐酸莱克多巴胺标准品约10mg至10mL量瓶中,按莱克多巴胺计用无水甲醇溶解并稀释至刻度,即得含莱克多巴胺lmg/mL的标准储备液。置一20℃冰箱中保存,有效期1年。

8、1.18 标准工作液A的制备取储备液0.25mL至25mL量瓶中,用无水甲醇稀释至刻度,摇匀,即得101μg/mL的标准工作液A,置4~80C冰箱中保存,有效期3个月。

8、1.19 标准工作液B的制备取工作液A 0.25mL至25mL量瓶中,用无水甲醇稀释至刻度,摇匀,即得100μg/L的工作液B,置4~8℃冰箱中保存,有效期1个月。

8、1.20 对照溶液的制备分别取工作液B 20μL、40μL、lOOμL、200μL、500μL、1000μL,按照9.3.6到9.4.3操作,得到lOμg/L、20μg/L、50μg/L、lOOμg/L、250μg/L、500μg/L 6个浓度点的对照溶液,临用前制备。

8、2 仪器和设备

8、2.1 GC-MS Agilent 6890-5973型,EI源

8、2.2 分析天平 精度0.000 01g,METFLER AE240型

8、2.3 分析天平 精度0.0lg

8、2.4 具塞离心管 50mL

8、2.5 具螺旋盖玻璃试管 5.OmL

8、2.6 匀浆机 NISSEI AM一6型

8、2.7 离心机 Himac CFl6RX型

8、2.8 涡旋混合器 IKA MS2型

8、2.9 酸度计 METTLER Toledo 320型

8、2.10 真空泵 Millipore WP6122050型

8、2.11 固相萃取装置 ALLTECH 24孔

8、2.12 干燥箱 ESPEC LC-213型温度范围40~2500C,精度±10C

8、2.13 样品浓缩器 PIERCE IL61105型

8、2.14 超声波清洗器SD-3200D型

9检验步骤

9、1 试料的制备

9、1.1取混匀后的供试样品,作为供试试料。

9、1.2取混匀后的空白样品,作为空白试料(阴性对照)。

9、1.3取空白试料5g,添加100μg/L莱克多巴胺标准工作液B 100μg,作为空白添加试料(阳性对照)。

9、2提取

9、2.1 精密称取供试试料5g(精确到0.01g),用0.1mol/L高氯酸溶液10mL匀浆,置于50mI.具塞离心管中,于超声波清洗器中超声20min,取出置于80%:恒温箱中加热30min。

9、2.2 冷却后以5 000r/min以上速度离心5min,取上层清液。

9、2.3 用0.1mol/L的高氯酸溶液10m1.清洗匀浆刀头后转入下层沉淀,涡旋振荡混合30s后以5 000r/min以上速度离心5min,将两次上清液合并。

9、2.4 用10%碳酸钠溶液调pH值至10.0±0.1,加入氯化钠4g,混匀,加入乙酸乙酯10mL,振荡混合10min后,离心或静止,吸取上层溶液于另一试管中。

9、2.5 在下层溶液中再加入乙酸乙酯10mL,振荡混合5min,离心或静止,合并上层溶液于上述同一试管中。

9、2.6 加入0.10mol/L的盐酸溶液4mL,涡旋混合30s,以5000r/min以上速度离心5min,吸取下层溶液。

9.2.7 在上层溶液中加入0.10mol/L的盐酸溶液4mL,涡旋混合30s,以5000r/min以上速度离心5min,合并两次下层溶液,调pH值至2.0,作为备用液。

9、3净化

9、3.1 将SCX固相萃取柱置于固相萃取装置上。

9、3.2 依次用无水甲醇5.0mL、水5.0mL和0.03moL/L盐酸溶液5.0mI.活化萃取柱。

9、3.3 将备用液过柱。

9、3.4 依次用水5.0mL、无水甲醇5.0mL淋洗萃取柱,真空抽干。

9、3.5 用4%氨化甲醇5.0mL洗脱,流速不得超过0.5ml/min,收集洗脱液于另一具塞玻璃试管中。

9、3.6 洗脱液于50~60%:水浴下用氮气吹干。

9、4 衍生化

9、4.1 取甲苯100g,L溶解残余物,涡旋振荡20s。

9、4.2 迅速加入BSTFA 100μL,加盖,于涡旋混合器上混匀。

9、4.3 于80℃的烘箱中加热1h,冷却至室温后,移人进样瓶中。

9、5 测定

9、5.1 气相色谱条件

9、5.1.1 色谱柱:HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.25mm(内径),0.25μm(膜厚)。

9、5.1.2 进样口:3000C。

9、5.1.3 进样方式:不分流。

9、5.1.4 进样体积:lμL。

9、5.1.5 柱温:70℃(保持0.6min),以25℃/min升温至2600C(保持2min),以25℃/min升温至280℃(保持6min)。

9、5.1.6 载气:氦气,流速1.0Ml/min(恒流)。

9、5.2 质谱条件

9、5.2.1 EI源。

9、5.2.2 GC/MS传输线温度:2800C。

9、5.2.3 溶剂延迟:10min。

9、5.2.4 EM电压:高于调谐电压200V。

9、5.2.5 分析器温度:2300C。

9、5.2.6 四极杆温度:150℃。

9、5.2.7 选择离子监测:(M/Z)179、250、267、502。

9、5.2.8 定量离子:250。

参考资料:兽药残留检测标准操作规程


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